前言

固態(tài)發(fā)酵(Solidstatefermentation)指體系在沒(méi)有或幾乎沒(méi)有自由水存在下，微生物在固態(tài)物質(zhì)上生長(cháng)的過(guò)程，過(guò)程中維持微 生物活性需要的水主要為結合水或與固體基質(zhì)結合的狀態(tài)。大部分研究者認為固態(tài)發(fā)酵和固體基質(zhì)發(fā)酵 (Solidsubstratesfermentation)是同一概念，可是Pandey等[1]卻認為固體基質(zhì)發(fā)酵是在無(wú)自由水條件下固體基質(zhì)作為碳 源或氮源的發(fā)酵過(guò)程，而固態(tài)發(fā)酵是在無(wú)自由水條件下利用天然或惰性底物(如合成泡沫)作為支持物的發(fā)酵過(guò)程。本文中將其統稱(chēng)為固態(tài)發(fā)酵。

近幾年來(lái)，隨著(zhù)世界性的能源危機和環(huán)境保護意識的增強，固態(tài)發(fā)酵重新受到重視，主要歸因于農業(yè)、工業(yè)廢棄物在固態(tài)發(fā)酵方面得到較大應用，比如土壤修復、生物轉化及生物燃料等，是工業(yè)應用的理想技術(shù)。

1   影響固態(tài)發(fā)酵的因素

影響固態(tài)發(fā)酵過(guò)程的因素很多，主要取決于基質(zhì)類(lèi)型、微生物選取和生產(chǎn)規模，可大致分為生物化學(xué)、物理化學(xué)和環(huán)境因素。所有的因素都是密切相關(guān) 的，不能獨立地看待。在特定的固態(tài)發(fā)酵過(guò)程中，單個(gè)因素作為生化還是物化因素需要區別開(kāi)來(lái)。某個(gè)因素在生化反應中可看做獨立的，但在物化反應中是相互影響 的，反之亦然[。所以，需要分析各個(gè)因素在固態(tài)發(fā)酵進(jìn)程中的影響。

1.1  固態(tài)發(fā)酵微生物

真菌和細菌是固態(tài)發(fā)酵使用較多的微生物，

真菌是比較理想的(如圖所示，真菌菌絲穿過(guò)基質(zhì)的皮殼到達淀粉顆粒)。接種真菌孢子較營(yíng)養細胞有一定優(yōu)勢:接種方便、靈活且易于保存較長(cháng)時(shí)間和 較高活性，但也有一定的缺點(diǎn)，如較長(cháng)的滯后期、孢子接種量較大;在孢子萌發(fā)之前需誘導孢子進(jìn)入代謝活動(dòng)和酶系合成以防孢子休眠。某些發(fā)酵過(guò)程需要菌絲接 種，如將毛殼菌菌絲接入小麥秸稈中進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵。接種密度(個(gè)/克物料)也是固態(tài)發(fā)酵的一個(gè)重要影響因子。

1.2  水分和水活度

底物含水量的變化對微生物的生長(cháng)及代謝能力有重要影響。低水分將降低營(yíng)養物質(zhì)傳輸、微生物生長(cháng)、酶穩定性和基質(zhì)膨脹;高水分將導致顆粒結塊、通氣不暢和染菌。固態(tài)發(fā)酵過(guò)程中水分含量范圍應控制在30%~85%。不同微生物發(fā)酵水分應該是不同的。

微生物能否在底物上生長(cháng)取決于該基質(zhì)的水活度Aw。水活度除受基質(zhì)本身的影響外，還與溶質(zhì)的種類(lèi)和數量有關(guān)。不同微生物Aw要求也不同。一般而 言，細菌要求Aw在0。90~0。99之間;大多數酵母菌要求Aw在0。80~0。90;真菌及少數酵母菌要求Aw在0。60~0。70。因此，固態(tài)發(fā)酵 常用真菌原因就是其對水活度要求低，可以降低雜菌的污染。在固態(tài)發(fā)酵過(guò)程中，由于基質(zhì)的水解，物質(zhì)的溶出，Aw降低，將延長(cháng)微生物的滯后期，導致生物量減 少?？梢酝ㄟ^(guò)加無(wú)菌水、加濕空氣和安裝噴濕器等方法來(lái)提高Aw，以保證菌體正常生長(cháng)。

1.3  基質(zhì)和粒度

固態(tài)發(fā)酵基質(zhì)常為農業(yè)副產(chǎn)物、天然纖維素、固體廢料等。具有大分子結構的原料其惰性組織將氮源和碳源物質(zhì)緊緊包裹，不利于發(fā)酵，因此原料的預處 理是很重要的，主要通過(guò)物理、化學(xué)或者酶水解等方法降低被包裹或顆粒粒度，提高基質(zhì)可利用率。采用天然基質(zhì)進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，隨著(zhù)微生物的生長(cháng)，作為基質(zhì)結構 的部分碳源物質(zhì)被消耗，影響了傳質(zhì)和傳熱，通常在發(fā)酵過(guò)程中加入適量的具有穩定結構的支持物來(lái)改善。

基質(zhì)粒度關(guān)系到微生物生長(cháng)及傳質(zhì)傳熱效果，將直接影響到單位體積顆粒所能提供的反應表面積的大小，也會(huì )影響到菌體是否容易進(jìn)入基質(zhì)顆粒內部及氧 的供給速率和代謝產(chǎn)物的移出速率等[9]。小的顆?？梢蕴峁┹^大微生物攻擊表面積，提高固態(tài)發(fā)酵反應速率，是理想的選擇，但是在許多情況下太小的顆粒容易 造成底物積團，顆粒間空隙率也減小，導致阻力增大，對傳熱、傳質(zhì)產(chǎn)生不利的影響，導致微生物不良生長(cháng);大顆粒由于存在較大間隙有利于提高傳質(zhì)和傳熱效率， 還可提供更好的呼吸及通氣條件，但微生物攻擊表面積較小。

1.4  O2和CO2濃度

固態(tài)發(fā)酵系統的氣態(tài)環(huán)境直接影響到生物量的大小和酶合成的程度，需要控制空氣流動(dòng)來(lái)調整氣態(tài)環(huán)境。好氧微生物的理論呼吸熵(RQ)為1。0，低 于1。0將影響氧氣傳輸，微生物生長(cháng)受到阻礙，通過(guò)測定O2吸收速率和CO2合成速率(發(fā)酵尾氣分析儀進(jìn)行在線(xiàn)實(shí)時(shí)測定)，可以判斷微生物的生長(cháng)程度(反 應生物量的變化)，通過(guò)改變O2和CO2的分壓大小，可以控制微生物的生長(cháng)和代謝，進(jìn)而調節固態(tài)發(fā)酵過(guò)程。

1.5  溫度和pH值

由于微生物的生長(cháng)、蛋白質(zhì)合成、酶和細胞活性及代謝產(chǎn)物合成對溫度的敏感性，對溫度的控制很重要。大多數真菌的生長(cháng)溫度范圍在20~

55，致死溫度在 50~60。在發(fā)酵過(guò)程中，微生物代謝產(chǎn)生大量的熱，造成品溫上升很快(有時(shí)高達2/h)，如果產(chǎn)生的熱不能及時(shí)散去，就會(huì )影響孢子發(fā)芽、生長(cháng)和產(chǎn)物產(chǎn) 率。又固態(tài)發(fā)酵不同料層的物料溫度不同(在微生物生長(cháng)對數期可超過(guò)3/cm)，造成發(fā)酵不均一。因此，在固態(tài)發(fā)酵反應器設計方面，主要集中在如何傳熱，到 目前為止，最好的解決辦法是通風(fēng)。

固態(tài)發(fā)酵過(guò)程中由于代謝活動(dòng)，pH值會(huì )發(fā)生一定變化，最常見(jiàn)的是有機酸的生成，造成pH值下降。不同微生物的最適生長(cháng)pH值是不同的，真菌生長(cháng) pH值范圍在2。0~9。0，最適范圍在3。8~6。0;酵母最適范圍在4。0~5。0。低pH值可以有效地抑制污染菌的繁殖。對pH值很難采用合適的技 術(shù)進(jìn)行在線(xiàn)測定和控制，可在發(fā)酵原料中加入具有緩沖能力的物質(zhì)(對反應過(guò)程無(wú)影響)來(lái)緩沖pH值的變化。

1.6  通風(fēng)和攪拌

好氧發(fā)酵過(guò)程中對氧的需求及系統中傳質(zhì)、傳熱的需要，通風(fēng)和攪拌操作有重要的影響?？諝馑俾试黾涌商峁┪⑸锷L(cháng)所需氧氣，又可以移除CO2、 揮發(fā)性代謝物和反應熱，但很多因素影響O2的傳輸，如空氣壓力、通氣率、基質(zhì)空隙、料層厚度、培養基水分、反應器幾何特征及機械攪拌裝置的轉速等。氣流強 度可作為評判通風(fēng)強弱的標準，通氣質(zhì)量也很重要(特別是氣體濕度，可改變水活度)。合適的通風(fēng)強度和質(zhì)量可提高對溫度的控制。

由于基質(zhì)的不均勻性，通風(fēng)過(guò)程容易造成細胞代謝發(fā)生變化，需要通過(guò)攪拌來(lái)提高物料發(fā)酵、水分、溫度和氣態(tài)環(huán)境均一性。在選擇基質(zhì)時(shí)，應考慮基質(zhì) 特性，避免在攪拌過(guò)程中出現結塊現象，但過(guò)分的翻動(dòng)可能損傷菌絲體，抑制菌體生長(cháng)。間歇攪拌較連續攪拌有較好效果，對菌絲體的生長(cháng)及其在基質(zhì)上附著(zhù)更有 利。

1.7  固態(tài)發(fā)酵反應器

固態(tài)發(fā)酵反應器是目前限制固態(tài)發(fā)酵用于現代生物反應工程的一個(gè)重要因素。設計反應器需要考慮幾個(gè)方面的問(wèn)題:滅菌、接種、傳質(zhì)傳熱、取樣、供 氣、參數的測量和控制等。迄今為止已有許多類(lèi)型的固態(tài)發(fā)酵反應器問(wèn)世(包括實(shí)驗室、中試和工業(yè)生產(chǎn))，部分用于食用菌、酶制劑、動(dòng)物飼料和土壤修復等。

1.7.1  淺盤(pán)發(fā)酵反應器

淺盤(pán)發(fā)酵反應器是所有反應器類(lèi)型中最簡(jiǎn)單的發(fā)酵設備，結構見(jiàn)圖，是傳統發(fā)酵食品的酒曲生產(chǎn)采用的反應裝置，但是，散熱主要通過(guò)托盤(pán)傳導，即使通電冷卻也不足以去除代謝熱。此外還有傳質(zhì)傳熱速率低造成的高污染風(fēng)險和托盤(pán)利用率低等缺點(diǎn)。

1.7.2  流化床反應器

該反應器主要是在金屬網(wǎng)或多孔板上鋪置粉粒狀基質(zhì)，從底部往上吹空氣形成流化層狀態(tài)，兩種不同形式的流化床結構見(jiàn)圖。反應器的主要參數是粒徑大 小和顆粒分布，粒徑分布越狹窄，顆粒越容易保持流化狀態(tài)。反應器采用封閉系統可較好保持無(wú)菌狀態(tài)，發(fā)酵完成可提高空氣溫度直接將產(chǎn)品進(jìn)行干燥回收。這類(lèi)反 應器容積率低。

1.7.3  轉鼓式反應器

其基本形式是將一個(gè)圓柱形容器支架在一個(gè)轉動(dòng)系統上，轉動(dòng)系統主要起支撐及提供動(dòng)力作用，結構示意見(jiàn)圖。轉鼓式發(fā)酵器轉動(dòng)速率一般為 1~16r/min，有的可達到更高轉速，真菌菌絲體的破壞程度對轉速較敏感。這類(lèi)反應器重點(diǎn)要解決好物料結塊和粘壁的問(wèn)題，其次是反應器容積率低。增加 破碎板(網(wǎng))可以解決結塊問(wèn)題。

1.7.4  圓盤(pán)式反應器

圓盤(pán)式反應器底部通常由兩層金屬網(wǎng)制成，無(wú)菌空氣由底部均勻進(jìn)入1m左右厚的發(fā)酵基質(zhì)。幾個(gè)并排的螺旋式攪拌器在以一定的速度水平運動(dòng)的同時(shí)， 還以適當的轉速自轉。在攪拌器上還有2~3個(gè)噴頭，用于補水，結構示意見(jiàn)圖。本反應器易于放大進(jìn)行工業(yè)生產(chǎn)，但不能進(jìn)行無(wú)菌操作，只能用于自然發(fā)酵和混合 發(fā)酵過(guò)程。

1.7.5其他

還有根據不同需要制作的不同固態(tài)發(fā)酵反應器，如氣相雙動(dòng)態(tài)固態(tài)發(fā)酵技術(shù)及裝置(示意見(jiàn)圖。該項技術(shù)已成功地從實(shí)驗室的2、50、800L放大到25、50、70m3的工業(yè)級生產(chǎn)規模。應用范圍涉及到抗生素、酶制劑、有機酸、食品添加劑、生物農藥和生物肥料等。

2  現代固態(tài)發(fā)酵技術(shù)的應用

固態(tài)發(fā)酵技術(shù)在傳統功能食品和酒類(lèi)釀造方面得到了廣泛應用，如醬油、米酒、豆豉、黃酒和白酒等。從傳統固態(tài)發(fā)酵發(fā)展到現代固態(tài)發(fā)酵，該技術(shù)在生 產(chǎn)抗生素、酶制劑、精飼料、有機酸、生物活性物質(zhì)等方面發(fā)揮了重大作用，并進(jìn)一步擴大到生物轉化、生物燃料、生物防治、垃圾處理及生物修復等領(lǐng)域，固態(tài)發(fā) 酵作為潛在的技術(shù)引起人們的密切關(guān)注。

2.1  生物轉化

利用固態(tài)發(fā)酵技術(shù)對農作物及農作物殘渣進(jìn)行生物轉化提高其營(yíng)養價(jià)值具有巨大經(jīng)濟價(jià)值?，F在食品和飼料行業(yè)對其利用越來(lái)越廣泛。如利用根霉菌對木 薯及木薯渣進(jìn)行發(fā)酵以提高其營(yíng)養價(jià)值;利用白腐菌或黃孢原毛平革菌對木質(zhì)纖維素進(jìn)行降解；利用木霉發(fā)酵棕櫚提高其在飼料行業(yè)的利用率。

2.2  生物燃料

用農業(yè)、工業(yè)殘渣固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)生物燃料可大致分為兩大類(lèi):氣體和液態(tài)生物燃料。對傳統沼氣進(jìn)行凈化可得到新型生物燃料;生物制氫是一個(gè)相對較新 的生物燃料的氣體類(lèi)型，由氫細菌、產(chǎn)酸和產(chǎn)甲烷細菌聯(lián)合厭氧發(fā)酵農工業(yè)廢物。液體生物燃料最近被分為生物乙醇和生物柴油。由于世界能源危機生物乙醇表現出 了振奮人心的重要性，生物柴油作為石油的潛在替代品不斷得到發(fā)展。利用固態(tài)發(fā)酵方法生產(chǎn)生物乙醇有可消除糖的制備過(guò)程，節省成本;降低發(fā)酵罐體積，無(wú)廢 水;降低能耗等優(yōu)點(diǎn)，發(fā)酵過(guò)程由酵母產(chǎn)生的轉化酶和酒化酶對天然原料(如甜菜、蘋(píng)果渣、甜高粱和木薯等)進(jìn)行轉化。與酒精不同，生物柴油是一種酯，生物發(fā) 酵提取的乙基或甲基酯可以與傳統柴油混合或100%地作為生物柴油使用。Amin等用微藻處理工業(yè)廢水生產(chǎn)藻油取得突破性進(jìn)展，藻油經(jīng)簡(jiǎn)單處理即可作為生 物柴油。

2.3  生物防治

生物防治是一種既不污染環(huán)境，又可殺死害蟲(chóng)或病菌的辦法，是利用有益生物或其他生物來(lái)抑制或消滅有害生物的一種防治方法，常見(jiàn)的有應用真菌、細 菌、病毒和能分泌抗生物質(zhì)的抗生菌(對人體和環(huán)境不產(chǎn)生公害)。利用固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)真菌殺蟲(chóng)劑，藥物對害蟲(chóng)的毒力得到極大的提高。如早期的白僵菌、蘇云金桿 菌殺蟲(chóng);又如假單孢桿菌、哈慈木霉和綠色木霉復合使用能最大限度地抑制尖孢鐮刀菌香蕉轉化型。使用固態(tài)發(fā)酵微生物肥料能減輕西瓜、黃瓜連作障礙。

2.4  垃圾處理

目前國、內外城市垃圾處理主要采用填埋、焚燒、發(fā)酵等方法，其中填埋技術(shù)占地面積大，不易降解;采用垃圾焚燒技術(shù)，其減量化程度高，但投資巨大 且受到煙氣排放的制約;發(fā)酵技術(shù)具有減容、減量及無(wú)害化程度低及可再循環(huán)利用等優(yōu)點(diǎn)成為國內外垃圾處理方面的首選。利用固態(tài)發(fā)酵技術(shù)加工處理生活垃圾，不 但解決了資源短缺等問(wèn)題，同時(shí)降低了垃圾排放。德國Eggersmann公司采用Horstmann隧道倉發(fā)酵系統對分類(lèi)收集的有機垃圾、不含重金屬等工 業(yè)有害物進(jìn)行處理，生產(chǎn)高等級的有機肥料，處理能力為7。3萬(wàn)t/年。西班牙巴塞羅那的ECOPARE垃圾綜合處理廠(chǎng)采用垃圾前分選、好氧堆肥、厭氧發(fā) 酵、沼氣發(fā)電等工藝可處理城市混合垃圾和餐館垃圾，日綜處理能力為1050。t加拿大Edmonton處理廠(chǎng)采用滾筒發(fā)酵工藝技術(shù)，每年生產(chǎn)12。5萬(wàn)t 腐熟堆肥。中國廣東省博羅縣采用分選、有機垃圾發(fā)酵、肥料加工、可燃物熱解、氣化發(fā)電、無(wú)機垃圾填埋等工藝相結合的系統集成技術(shù)對生活垃圾進(jìn)行處理，生產(chǎn) 有機復混肥。

2.5  生物修復

固態(tài)發(fā)酵生物技術(shù)是有毒化合物生物降解與

環(huán)境生物修復的有益工具。如國家海洋局第三研究所學(xué)者利用太平洋深海紅球菌(Rhodococcussp。TW53)修復石油污染海水和湖水， 石油的分解率達到90%，同時(shí)收集菌體還可得到富含FA的油脂59。18%。利用P。ostreatus對含有咖啡因的物質(zhì)進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵進(jìn)行生物修復可達 到對咖啡因降解的目的。希臘學(xué)者利用微生物去除垃圾填埋場(chǎng)中的腐植酸，去除率可達85%以上。

轉自河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報 ( 自然科學(xué)版 ) 第 3 2卷第 1 期《現代固態(tài)發(fā)酵技術(shù)工藝、設備及應用研究進(jìn)展》作者：李浪、楊旭、薛永亮